ITRIQ
蛋白組測序分析

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 同位素標記相對和絕對定量(iTRAQ)
同位素標記相對和絕對定量(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation, iTRAQ)技術的發展得益于可進行多重標記的iTRAQ試劑的開發,該試劑結構由指示基團、中性平衡基團和反應基團三部分組成。不同指示基團及其相對應平衡基團的質量和都相同,而反應基團能與賴氨酸ε氨基和所有肽鏈的氨基末端連接,可標記所有氨基酸。不同標記試劑與來源于不同樣品胰酶消化后的肽段結合,經過色譜分離,并通過一級質譜和二級質譜。平衡基團在二級質譜時發生中性丟失,而報告基團在二級質譜低質量區域產生多個報告離子,其信號強度分別代表該標記樣品的表達量,根據報告離子的峰面積計算同一蛋白質同一肽段在不同樣品間的比值,從而實現蛋白的相對和絕對定量。
多達8個樣品的定量:可同時標記2-8個樣品,一次實驗實現多達8個樣品的蛋白質鑒定和定量
iTRAQ技術:iTRAQ技術不僅可發現胞漿蛋白,還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技術可檢測出低豐度蛋白、強堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
同時多點監測:可以進行多個時間點蛋白質組動態變化的監測
分析詳細:可以分析詳細分期/型的臨床疾病樣本,并可設計樣本重復
個體樣本研究;甚至可以進行個體樣本的研究
范圍廣:細胞周期、細胞信號傳導整個過程的蛋白質組動態學
iTRAQ蛋白組數據分析流程
 
樣本要求
樣品類型及需求量:
植物組織≥200 mg
血液樣品≥1ml(血漿注意用EDTA防凝)
血清0.5ml
尿液2ml
動物組織≥1 g
細胞≥107個
酵母、微生物等干重200mg
其它樣本類型請于帕諾米克銷售支持。
樣本的保存:根據不同樣品類型,樣品請置于不同大小的離心管中,具體請向銷售咨詢。
樣品運輸:以3-4公斤干冰揮發一天計算,請使用足量的干冰運輸(建議盡量選用較大塊的干冰,大塊的干冰揮發較慢),并用泡沫盒封閉。并且盡量選用較快的郵遞方式,以降低運輸過程中樣品降解的可能性。



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